在成功獲取并培養(yǎng)了人咽鱗癌細(xì)胞FaDu細(xì)胞后，接下來進(jìn)入實(shí)驗(yàn)操作的核心階段。首先，我們需要對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理，以確保實(shí)驗(yàn)所需細(xì)胞量的充足及細(xì)胞活力的維持。具體操作如下：
1. **準(zhǔn)備培養(yǎng)基與試劑**：確保新鮮的培養(yǎng)基（如RPMI-1640培養(yǎng)基）已預(yù)熱至37℃，并含有10%胎牛血清及必要的抗生素（如青霉素和鏈霉素），以防污染。同時(shí)，準(zhǔn)備胰蛋白酶-EDTA溶液用于細(xì)胞消化。
2. **細(xì)胞消化**：在顯微鏡下觀察FaDu細(xì)胞生長情況，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到約80%-90%時(shí)，吸去舊培養(yǎng)基，用無菌PBS輕輕洗滌細(xì)胞兩次，以去除殘留的培養(yǎng)基和死細(xì)胞。隨后，加入適量預(yù)溫的胰蛋白酶-EDTA溶液，覆蓋細(xì)胞表面，放入37℃、5% CO?培養(yǎng)箱中孵育約3-5分鐘，直至細(xì)胞間隙增大，形態(tài)變圓。
3. **細(xì)胞收集與重懸**：輕輕拍打培養(yǎng)皿底部，使細(xì)胞脫落，加入等體積的新鮮培養(yǎng)基終止胰酶作用，用移液槍輕輕吹打細(xì)胞懸液，確保細(xì)胞充分分散成單個(gè)。
4. **細(xì)胞計(jì)數(shù)與接種**：取少量細(xì)胞懸液進(jìn)行計(jì)數(shù)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求調(diào)整細(xì)胞密度后，將適量的細(xì)胞懸液接種到新的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)板中，輕輕搖晃使細(xì)胞均勻分布，然后放回培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
5. **后續(xù)處理**：根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，F(xiàn)aDu細(xì)胞可用于多種實(shí)驗(yàn)，如藥物敏感性測試、基因編輯、信號通路研究等。在接下來的步驟中，可能需要對細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染、加藥處理或收集細(xì)胞進(jìn)行分子生物學(xué)分析。每一步操作都需嚴(yán)格遵循無菌原則，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
通過以上步驟，我們成功完成了FaDu細(xì)胞的傳代與基本處理，為后續(xù)深入研究奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
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